Elabscience丙二醛(MDA)比色法測試盒(測細胞)適用于檢測細胞樣本中的丙二醛含量。

過氧化脂質降解產物中的丙二醛(MDA)在高溫及酸性環(huán)境下可與硫代ba比妥酸(TBA)反應產生紅棕色產物 3,5,5’-三甲基惡唑 2,4-er酮(三甲川)，該物質在 532 nm 處有最大吸收峰。

試劑準備

① 檢測前，試劑盒中的試劑平衡至室溫。

② 試劑一2-8℃存放時會凝固，使用前37℃加熱，直到透明液體方可使用。

③ 試劑三若有析出，需在80℃加熱溶解，冷卻后使用。

④ 試劑二應用液的配制：

按試劑二：雙蒸水= 1.2:34的比例進行配制，2-8°C保存3個月。

⑤ 工作液的配制：

按試劑一：試劑二應用液：試劑三= 0.2:3:1的比例進行配制，現配現用。

實驗關鍵點

① 水浴反應 40 min 時溫度要控制在 95-100°C。

② 吸取上清液到酶標板時，防止產生氣泡。

③ 試劑三中若有析出，需 80℃水浴加熱溶解后使用。

操作步驟

① 空白管：取 0.1 mL 無水乙醇，加入到 1.5 mL EP 管中。

標準管：取 0.1 mL 10 nmol/mL 標準品，加入到對應的 1.5 mL EP 管中。

樣本管：取 0.1 mL 待測樣本，加入到 1.5 mL EP 管中。

② 向①中各管加入 1 mL 工作液。

③ EP 管口用保鮮膜扎緊，充分混勻，并在保鮮膜上扎一個小孔，100°C水浴 40 min。

④ 流水冷卻至室溫，1078×g 離心 10 min。

⑤ 用微量移液器取上清液 0.25 mL 到酶標板。(不能將沉淀加入酶標板中)。

⑥ 酶標儀上測定 532 nm 處的 OD 值。

注：如果不用保鮮膜，可先用注射器針頭在 EP 管蓋上扎一個小孔，防止水浴時，管蓋崩開。

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